731302、731301等-多层细胞培养瓶

NEST细胞培养瓶操作流程：

多层细胞培养瓶的操作流程主要包括以下几个步骤：

1. 细胞悬液混匀：根据实验要求制备细胞悬液，并在培养基瓶、培养瓶或其他容器中混匀。建议每层的工作容积为30-50 mL。

2. 接种细胞悬液：使用移液管紧贴瓶壁缓慢地将细胞悬液加入到多层细胞培养瓶中，注意避免产生泡沫或气泡。使用10 mL移液管可以伸到培养瓶底部使培养基分散开，而25 mL移液管则只能伸到NEST标志的地方。

3. 平衡液体：将培养瓶有NEST标志的一侧朝向自己，顺时针倾斜45度左右放置一段时间，使瓶中各个隔层的液体达到平衡。

4. 水平放置培养瓶：轻缓地将培养瓶水平放置于工作台上，NEST标志面朝上。

5. 晃动培养瓶：前后左右轻轻晃动多层瓶，使液体均匀分布在每层生长面上。注意晃动要轻柔，防止起泡沫和培养基渗漏到下层。

6. 移除培养液：可以选择抽吸或倾倒培养基的方法去除培养基。抽吸时，将多层瓶倾斜45度，有NEST标记的一面朝向自己，使用10 mL或2 mL移液管抽吸培养基。

7. 细胞的收集：用缓冲液清洗一遍以去除残留的血清，后加入消化液（每层大于5 mL），混匀。消化大约2分钟后，用消化终止液中和消化液。采用移液管抽吸法或倾倒法将细胞悬液置于离心管等容器中。

8. 冲洗培养瓶：用一定量的缓冲液冲洗多层瓶三次，将冲洗液同时置于离心管中，混匀计数或者传代接种。

9. 放置于CO2培养箱：最后，将培养瓶水平轻缓转移放置于CO2培养箱中。

NEST细胞培养瓶使用注意事项：