血清使用中常见问题

                                                                    血清使用中常见问题
                                                                  检硕科学上海有限公司

      胎牛血清、新生牛血清、小牛血清有何区别？
胎牛血清：指健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清，其胎球蛋白较多，血清白蛋白含量高，而r-球蛋白含量极低甚至没有，并富含多种生长因子，是培养细胞zuiyou质的血清。

新生牛血清：指健康母牛正常分娩后不久采集加工而成的血清，其内含多种生长因子。

小牛血清：指出生后饲养一定时间（一周至六个月）再采集加工而成的血清，因与外界接触时间过长，故血清内r-球蛋白含量较高，不利于细胞培养，特别是不利于病毒研究与疫苗生产。

1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？

将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。  

长时间储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理？

沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。

3. 为什么要热灭活血清?

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

4. 有必要做热灭活吗?

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或*没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增

5. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?

GIBICO的胎牛血清 没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。

6. 如何避免沉淀物的产生?

解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。

解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。

血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

7、细胞培养中如何防止黑点生成？

（1）尽可能地减少血清冻融次数；

（2）培养基无需37℃水浴；

（3）培养基保持最佳PH值7.0-7.2；  

（4）严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗；  

（5）掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。

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