HE染色。

                                                                              HE染色。

                                                                    检硕科学上海有限公司
染色结果观察苏木精—伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

细胞核裂解、溶解、细胞肿胀、细胞膜不完整的特征。神经元细胞周围有空白区域，提示有水肿的存在。

小鼠饲喂了高脂肪食品，在血管周围可见脂肪空洞。水泡样变性和脂肪变性 炎症细胞浸润。

在HE染色条件下，脂类均会被染色过程中使用到的二甲苯等有机溶剂溶解而成空泡或空斑样，一般情况下，空泡样脂滴轮廓清晰，易于分辨。但是为了证明确实是脂类，还需用针对脂类的特殊染料及染色方法，如油红，苏丹黑等。

脂肪变性在石蜡切片HE染色下的有两个特点：1.细胞核被脂滴挤向一侧，2.由于脂肪被溶解，空泡很干净，边缘整齐。

空泡变性：核在中央，空泡内有网状物质边缘不整齐。

染色步骤

1、取材与固定：

从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。

2、脱水透明：

一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。

3、浸蜡包埋：

将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡*浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。

4、切片与贴片：

将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。

5、脱蜡染色：

常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最

后入蒸馏水，就可染色。HE染色过程是：

①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。 ②酸水及氨水中分色，各数秒钟。③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

6、脱水透明：

染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。

7、封固：

将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用

                                                                                                                                  本篇转至实验之家