荧光定量PCR耗材的使用和选择注意事项

　　荧光定量PCR耗材的使用和选择注意事项

　　PCR板

　　PCR板是一种在聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中主要作为参与扩增反应的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、缓冲液等的承载物。

　　PCR板材质

　　其本身材质在当今主要以聚丙烯(PP)为主，能更好适应PCR反应过程中反复高低温设定，并且能够实现高温高压灭菌操作。为配合排枪、PCR仪等实现高通量操作，较常使用的为96孔或384孔的PCR板。板型符合SBS国际标准，且为适应不同厂家的PCR仪，根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边、升裙边和全裙边四种设计模式。

　　PCR板常见颜色

　　有透明和白色，其中白色更适合用于新型的实时荧光定量PCR。

　　PCR板用途

　　广泛应用于遗传、生化、免疫、医药等领域，不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA，RNA的地方，属于实验室一次性易耗品。

　　如何正确使用96孔PCR孔板

　　PCR板有透明和乳白色可选，其中乳白色更适合用于顶部采集荧光信号的新型荧光定量PCR仪(如伯乐CFX系列，ABI 7500fast 以上型号， Roche 480系列)，但如果荧光定量PCR仪是底部光源的，则应选择透明的。

　　PCR板根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边和全裙边三种设计模式，不同厂家的荧光定量PCR仪会设计不同的切角或边缘凸起，请选择适合该PCR仪的板子。

　　PCR板又分100ul体积(矮板)和200ul体积(高板)，根据机型的不同选择，选择不同高度孔板，避免高度错误对机器造成破坏和加热不均导致数据失真。

　　当使用96孔板做荧光定量PCR实验的时候，推荐使用光学膜代来密封反应孔。正确的封膜方法是：先沿着96孔板的纵向压膜，然后横向，最后沿着板的边缘按压使之密封。具体手法见下面图示：

　　加样后会在管壁上飞溅一些小液滴，另外反应体系内也会有一些气泡，需要离心去掉挂壁液滴和气泡。请使用专用的微孔板离心机解决上述问题。

　　PCR板属于一次性消耗品，生产一次成型，不建议剪开使用容易造成实验误差增加，不能清洗或部分重复利用。不要为了节省一点小钱，而给实验带来后续分析上的困扰。

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