实验室细胞培养板如何选择!

　　实验室细胞培养板如何选择!

　　细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。

　　(一)平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择：

　　贴壁细胞一般用平底培养板。悬浮型细胞的培养一般用V型。

　　U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。

　　细胞培养板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于细胞贴壁生长与伸展。当然还有浮游细胞的生长材料，同时还有low binding surface，有关更多实验材料上的应用与对材料的选择。

　　问：我想测吸光度用酶标仪，用多孔细胞培养板行吗?请问酶标板 多孔细胞培养板有什么区别?

　　答：用多空细胞培养板测吸光度肯定可以拉，我们经常用它来做样品的蛋白定量和MTT检测。

　　区别：酶标板一般要比细胞培养板贵，细胞板主要做细胞培养，但也可以用来测蛋白浓度;酶标板包括包被板和反应板，一般不能用做细胞培养，它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测，它需要更高的要求还需要特定的酶标工作液。如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子：见网站

　　常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体(氧气)交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。

　　培养器皿 面积(cm2)培养液量(ml) 细胞量

　　96 孔培养板 0.32 0.1 10e5

　　24孔培养板 2 1.0 5×10e5

　　12孔培养板 4.5 2.0 10e6

　　6孔培养板 9.6 2.5 2.5×10e6

　　3.5 cm 培养皿 8 3.0 2×10e6

　　6 cm 培养皿 21 5.0 5.2×10e6

　　10 cm 培养皿 55 10.0 13.7×10e6

　　25cm2 培养瓶 25 5.0 5×10e6

　　75cm2 培养瓶 75 15～30 2×10e7

　　(一)细胞培养板的密闭和污染问题：

　　细胞培养板的加样和操作：细胞培养板在进行细胞操作时同样遵循严格无菌的原则，各项操作要保证规范、科学，不对细胞的生长造成额外的影响。这其中最常见的问题就是如何保证加样后细胞的均匀和尽量减少换液对细胞生长状态的影响。

　　问：96，24孔培养板或培养皿的盖子都很松，这样是方便了透气，但是细菌、霉菌等污染物会不会也随着溜进去呢?

　　答：1.盖子很松，属于半开放培养，这样的目的是透气(实际上是为了使培养皿外的co2能够与培养皿充分交换，维持培养基的pH值)。

　　2.凡事有利必有弊，这样当然增加了污染的可能性。此外这样还会使培养皿内的液体蒸发，这对于精确定量的药物来说就显得值得注意了。所以以下二条措施是必须的a培养箱内空气必须清洁(定期紫外线照，酒精擦洗，尽量少开关培养箱)b培养箱内的湿度必须始终保持为*(培养箱内放置无菌蒸馏水的水槽)。

　　(二)细胞分布不均及解决办法：

　　问：我的细胞接种培养板，细胞总是聚集在周边部分，该如何处理啊?我看园子里有的战友的细胞却是聚集在中间，是不是板子的质量问题啊?

　　答：请问你的细胞是如何混匀的?是滴管吹打还是振荡培养板?如果是后者，而且是转圈摇匀的话，很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分，导致细胞中间少，四周多!自己可是试试!

　　周边一般是相对会多一点，但是中间的数量也不会很少啊~~ 铺板的时候我也没有特异去振荡培养板。

　　(三)6孔板接种和换液：

　　问：我的细胞传代很正常，但一种到六孔板里(不管加药和对照)，总有两三个孔(随机)细胞长得不好，很小，像破碎了。有人遇到过这种情况吗?到底是啥原因呢?请各位指点

　　答：可能跟你加液的温度有关。如果你细胞刚刚拿出来换液加液，培养基也是从4度冰箱拿出来不久，很容易细胞就会冻死了。建议你最好把培养基先在培养箱里边孵育15min先。

　　(四)24孔板接种：

　　问：我把细胞消化接种到24孔板之后，已经四天了，老是每孔的中间部分长不满，每天换液时都用PBS 清洗，第二天换液时都出现同样的情况，每孔的边缘长的很好，中央大量死细胞，是什么原因!

　　答：是中央长不满，还是中央有和边缘相同密度的细胞，但是大部分都是死细胞?如果是前者，也许不是技术问题，而是物理问题了。

　　我是选择孔内铺盖玻片，在玻片上种植。每次换液都用PBS洗，必要的步骤吗?另外，也有可能和细胞种类有关或者和培养液有关?

　　我想你的培养液可能加的太少了。由于表面张力的作用，培养板的边缘液体会向上走，造成培养液面呈现一个凹面(就像量筒的液体凹面一样)，中央的细胞正好在凹面的处，培养液少，细胞的营养不够，甚至干涸掉，空气中的氧气也会造成损伤，即使有增值过来的细胞也会死掉。

　　经验：

　　1.所有待接种的细胞悬液在种板前一定要用吸管混匀。

　　2.按资料记载，24孔板的液体量为1ml，个人也觉得1ml的量足矣。

　　3.接种时，要慢慢加样，且记得轻微旋转枪头，这样做对细胞均匀分布有一定效果。

　　4.接种后最好直接放入培养箱让细胞适应培养板这个新的环境，个人认为没有必要在室温放置一段时间。

　　5.根据细胞的特性，细胞均喜欢聚集在边缘生长，所以我考虑到，你的问题还有可能是接种时的细胞密度不够，导致周边密集，中间稀疏的错觉。你的拌种密度是多少?

　　另"要慢慢加样，且记得轻微旋转枪头"的意思就是:加样不能太快，避免细胞在一个加样处聚集，且注意在不同的部位进行加样，即边加边活动枪头，人为使细胞趋于均匀分布，我个人觉得有一定的效果，不知这次我解释清楚没有。

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