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Protein L亲和填料和筛选用预装柱产品
通过基因重组制备的抗体片段（Fab）等低分子抗体，与完整抗体相比，其分子尺寸更小，具有易扩散、渗透性强，以及不会与Fc受体产生相互作用、副作用小等优点。并且，可以利用大肠杆菌、CHO细胞等获得高浓度、高表达的抗体片段，因此在抗体药物、诊断用药的应用上备受关注。
一般来讲，低分子抗体的纯化工艺初步捕获（Capture）步骤推荐使用Protein L亲和层析（AFC），其后接离子交换层析（IEC）等进行精纯。下面介绍几个以Protein L为配基的亲和填料分离纯化低分子抗体的相关文献。
● 抗体的基本结构及分离抗体时使用的亲和层析配基
抗体结构 | 结合部位 | AFC配基 | 目标纯化物 | ||
| H链 | VH (VH3) | Protein A | IgG, Fab, F(ab')2, scFv, VH domain | |
CH1 | Protein G | IgG, Fab, minibody | |||
抗体片段 | |||||
CH2 (-CH3; Fc) | Protein A | IgG, Fc fusion protein | |||
Protein G | |||||
CH3 | 抗体片段 | ||||
Fc; N-glycan | Fc受体 | ||||
L链 | VL | Protein L | Fab, F(ab')2, scFv, diabody, minibody, VL domain, dAb | ||
CL | (Kappa) (Lambda) | 抗体片段 | Fab, F(ab')2, scFv, diabody, minibody, dAb | ||
（纯化工艺示例） | 培养上清（Fab) （大肠杆菌、CHO细胞等） | （候选填料例） TOYOPEARL AF-rProtein L-650F (TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F) （其他Protein G或抗体特异性AFC填料） TOYOPEARL Sulfate-650F TOYOPEARL GigaCap S-650M TOYOPEARL MX-Trp-650M (MXC) TOYOPEARL NH2-750F TOYOPEARL GigaCap Q-650M （其他疏水层析填料等） | |
预处理（离心等） | |||
Protein L亲和层析 | |||
IEC （阳离子交换层析） | |||
IEC (FT; Flow-through)等 （阴离子交换层析） | |||
● 使用Protein L亲和层析等填料从大肠杆菌、CHO细胞中纯化低分子抗体的相关文献
● 从大肠杆菌中分离纯化重组Fab和相关杂质的示例（文献No. 1）
（要点）
• 确立了大肠杆菌表达的重组低分子抗体(Fab)的纯化方法，并对相关杂质进行了分离和识别（表征）。
• 通过使用Protein L亲和层析、Protein G亲和层析及阳离子交换层析的三步层析法（自动化），对4种重组Fab进行纯化，再做质谱分析。
• 识别出纯化产物中的Fab异构体、Fab相关杂质的L链（LC）以及L链的低分子片段（LMW）。
• 自动化Fab纯化及分析法的确立，让生产菌株及培养条件的优化变得容易。
● 使用Protein L亲和层析从大肠杆菌分离纯化重组Fab及相关杂质的示例（出自文献1）
使用TOYOPEARL AF-rProtein L-650F，有效分离出目标物质Fab，以及产品相关杂质的L链（LC）和LC低分子片段（LMW）。
Ref.: C. Schimek et al., Three-dimensional chromatography for purification and characterization of antibody fragments and related impurities from Escherichia coli crude extracts,
J. Chromatography A, available on line November 13, 2020, 461702
● Protein L亲和填料和筛选用预装柱产品一览表
货号 | 产品名称 | 粒径 （μm） | 包装** (mL) | 备注 |
0023486 | TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | 30 - 60 | 10 | 散装填料（瓶） |
0045200 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | 30 - 60 | 1 mL×1支 | 预装柱 |
0045221 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | 30 - 60 | 1 mL×5支 | 预装柱 |
0045257 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein L-650F | 30 - 60 | 5 mL×1支 | 预装柱 |
0045228 | SkillPak Antibody (TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F, AF-rProtein L-650F, NH2-750F, Sulfate-650F, GigaCap Q-650M, GigaCap S-650S) | - | 1 mL×6种×1支 | 预装柱 |
0045229 | SkillPak mAb Platform (TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F, NH2-750F, Sulfate-650F) | - | 1 mL×3种×2支 | 预装柱 |
0045232 | SkillPak Best-in-Class (Ca++Pure-HA*, TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F, AF-rProtein L-650F, NH2-750F, Sulfate-650F) | - | 1 mL×5种×1支 | 预装柱 |
* Ca++Pure-HA是美国制造的产品，受美国相关出口法令管辖。
**填料有不同粒径和不同包装规格的产品。
SkillPak分为1 mL预装柱（7 mm I.D.×2.5 cm）和5 mL预装柱（8 mm I.D.×10 cm）。
【1 mL预装柱】
进口：使用“货号0017955 拉紧螺栓型（带包头）”，不可使用“货号0016566 便携式接头·1/16"（PEEK）”。
出口：可直接连接内螺纹接头，连接外螺纹接头时需使用管套（“货号0017898 拉紧螺栓型管套”）等配件。
【5 mL预装柱】
进口和出口：使用“货号0016566 便携式接头·1/16"”或“货号0017955 拉紧螺栓型（带包头）”。
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