婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定 参考GB 5413.20-2022

按照《GB 5413.20-2022 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》中LC-MS方法，对胆碱标准品进行了分析。

国标方法中使用Amide色谱柱，本实验使用等效HILIC型PC色谱柱（磷酸胆碱键合型HILIC色谱柱）进行了分析，由于CAPCELL CORE PC色谱柱保留能力更强，考虑整体分析时间，以及蛋白样品可能在初始比例有机相中析出等问题，我们将初始有机相百分比降低至80%进行了分析。

如图1所示，胆碱标准品保留时间为3.0 min，峰型良好。

同时我们按照国标方法中的要求，对胆碱系列浓度标准品（0.010 -0.200 mg/L）进行分析，得到良好线性结果，r=0.9979，如图2所示。

方法检出限为0.18 mg/100g，满足方法检出限要求。

图1  标准品分析结果

【色谱条件】

色谱柱：CC PC S2.7; 2.1 ×100mm

流动相：A：10 mmol/L甲酸铵，甲酸调节pH为5.0

流动相：B：乙腈

流动相：B%  80%(0min) - 80%(1min) - 60%(3min) - 60%(5min) - 80%(5.1min) - 80%(8min)

流动速：0.3 mL/min

温动度：40 ℃

检动测：LC-MS; ESI; 104.1>60.0(CE 22 DP 80); 104.1>45.0(CE 26 DP 80)

浓动度：0.3 mg/mL

进样量：2 µL

图2  线性分析结果

按照国标中19.1样品前处理方法，对液态牛奶样品进行了前处理，进样分析，得到结果如图3所示，牛奶样品中含有胆碱量为1.08 mg/100g。

图3 牛奶样品分析结果

【色谱条件】

色谱柱：CC PC S2.7; 2.1 ×100mm

流动相：A：10 mmol/L甲酸铵，甲酸调节pH为5.0 

流动相：B：乙腈

流动相：B%  80%(0min) - 80%(1min) - 60%(3min) - 60%(5min) - 80%(5.1min) - 80%(8min)

流动速：0.3 mL/min

温动度：40 ℃

检动测：LC-MS; ESI; 104.1>60.0(CE 22 DP 80); 104.1>45.0(CE 26 DP 80)

浓动度：0.3 mg/mL

进样量：2 µL

样品制备：称取2.5 g试样，用温水溶解后， 转移至25 mL容量瓶中，冷却至室温，用水定容混匀。吸取1 mL样液于50 mL比色管中，加入1 mol/L的盐酸溶液10 mL，摇晃均匀，超声振荡5 min。样液在70 ℃水浴中加热3 h，冷却至室温后用1 mol/L的氢氧化钠溶液调节pH 至5.0， 转移至100 mL容量瓶，用水定容，混匀。然后用流动相A稀释10倍后，经0.22 µm水性滤膜过滤至进样瓶中，待测。

（1）在进样过程中发现，由于该分析方法初始比例为高比例乙腈，高比例乙腈有可能导致样品中剩余的少量蛋白在流动相条件中析出，堵塞色谱柱造成柱压升高。可考虑在样品配置后，使用初始比例流动相对样品进行最终稀释进样。

（2）HILIC系色谱柱日常使用维护与反相色谱柱有较大差别，需注意HILIC色谱柱的冲洗和保存。

综上所述，使用CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1 mm i.d.×100 mm色谱柱，按照《GB 5413.20-2022 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定》中第三法液相色谱-质谱串联法，能够获得良好检测结果，满足标准要求。