Symmetry色谱柱的使用注意事项（含保护柱、样品制备、pH、压力等）

为确保Symmetry色谱柱始终保持理想性能，请遵循以下原则：

a. 保护柱

在进样器和分析柱之间使用填料化学和颗粒大小都适合的沃特世保护柱。使用匹配的高性能保护柱，是保护主色谱柱而不影响或改变分析分离度的重要措施。保护柱需要根据样品污染情况定期更换。当系统背压稳步上升至设定压力限值时，通常表明需要更换保护柱。突然出现分叉峰也表明需要更换保护柱。

b. 样品制备

1. 样品中的杂质往往会污染色谱柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有适合填料的Oasis™固相萃取小柱/色谱柱或Sep-Pak™小柱净化样品。

2. 为获得理想峰形和灵敏度，优先选用运行分析时要用的流动相或比它更弱的流动相（有机改性剂含量更低）来制备样品。

3. 如果样品不是使用流动相制备的，务必确保样品、溶剂和流动相可以混溶，以避免样品和/或缓冲液产生沉淀。用0.2μm滤膜过滤样品，去除颗粒物质。如果用于溶解样品的溶剂含有机改性剂（如乙腈、甲醇等），请确保滤膜材料不溶于该溶剂。请联系滤膜生产商了解滤膜的溶剂兼容性。或者，可以考虑在8,000 rpm下离心样品溶液20 min，然后将上清液

转移至适当的样品瓶中。

c. pH值范围

Symmetry色谱柱的推荐pH范围为2~8。表2列出了常用的缓冲液和添加剂。此外，柱寿命将根据操作温度、使用的缓冲液类型和浓度而有所不同。例如，在高温下使用pH值为8的磷酸盐缓冲液会缩短色谱柱寿命。

表2：在pH 2~8范围内使用Symmetry色谱柱时的推荐缓冲液。

d. 溶剂

  为了保持理想的色谱柱性能，请使用优质的色谱级溶剂。所有水性缓冲液在使用前都必须过滤。推荐使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®过滤器。含有悬浮颗粒物的溶剂通常会堵塞色谱柱入口筛板的外表面，这会导致操作压力增大，性能变差。使用前，请将所有溶剂彻底脱气，避免泵和检测器中形成气泡。沃特世还建议使用在线脱气装置。运行低压梯度时，溶剂脱气尤其重要，因为在梯度运行过程中混合水相溶剂与有机溶剂时可能形成气泡。

e. 压力

  Symmetry色谱柱可承受的压力上限为6,000 psi（400 bar或40 Mpa），但为了尽可能延长色谱柱和系统使用寿命，应避免压力超过4,000-5,000 psi。

f. 温度

  为了改善选择性、降低溶剂粘度和提高传质速率，Symmetry色谱柱的推荐操作温度范围为20℃~45℃。但是，任何高于室温的温度都会对色谱柱寿命产生不良影响，色谱柱寿命还会根据pH和缓冲液条件而有所不同。

IV. 放大/缩小等度方法

  以下公式可在保持线性流速不变的前提下放大或缩小方法，并计算出新方法的上样量：

如果色谱柱内径和长度改变：

F2 = F1(r2/r1)²

或

进样体积1 = 进样体积₂ (r2/r1)²(L2/L1)

其中: r = 色谱柱半径(mm)

F = 流速(mL/min)

L = 色谱柱长度(mm)

1 = 原始或参比色谱柱

2 = 新色谱柱

V. 故障排除

  保留时间、分离度或柱压变化通常是色谱柱污染所致。请参阅“色谱柱清洗、再生和储存”有关色谱柱故障排除问题的信息，请参阅最新的waters目录。