BEH Amide色谱柱的使用指南

操作范围

1. BEH Amide色谱柱可在pH 2~11的HILIC条件下运行常规分析，操作温度可达90 °C。

2. 和其他LC色谱柱一样，在pH、压力和温度的极值下运行会缩短色谱柱使用寿命。

色谱柱平衡

初次使用本色谱柱时，用50倍柱体积的60%乙腈:40%水溶液（或初始条件）平衡色谱柱。

初次进样之前，用20倍柱体积的流动相（初始条件）平衡色谱柱。

如果采用梯度条件，在进样之间用8~10倍柱体积的流动相平衡色谱柱。

色谱柱平衡不当会导致保留时间漂移。

流动相注意事项

1. 流动相或梯度中应始终保持至少3%的极性溶剂（例如3%水、3%甲醇或2%水/1%甲醇等）。

2. 推荐使用含缓冲液的流动相而不是添加剂。为获得理想分析结果，应始终保持缓冲盐浓度至少为10 mM。

3. 如果要使用添加剂，建议始终保持添加剂浓度至少为0.2%。

4. 流动相或梯度中应始终保持至少40%的有机溶剂（例如乙腈）。

5. 水相比例大于60%时，应使用较低的流速，避免柱压过高。此要求适用于所有的清洗步骤。

6. 避免在HILIC流动相中使用磷酸盐缓冲液以防止出现析出，但可以使用磷酸。

进样溶剂

1. 如果可能，进样溶剂应尽可能接近流动相组分（如果是等度分析）或起始梯度条件。除非安装了正己烷/四氢呋喃兼容性套件，否则切勿将丙酮用作样品溶剂/稀释剂。

2. 通用的进样溶剂为75:25乙腈/甲醇，该溶剂可以很好地平衡分析物溶解性和峰形。分离在有机溶剂中溶解度不高的糖类时，允许样品中含有浓度较高的水相溶剂。使用50:50乙腈/水可获得满意的结果。

3. 进样溶剂对峰形的影响应通过实验确定。在某些情况下，进样水（或高含水量溶液）可能并不会对峰形造成不利影响。

其他技巧

1. 初步探索色谱条件时，可运行95%乙腈至50%乙腈的梯度。若无保留，可运行95:3:2乙腈:甲醇:水相缓冲液的等度条件。

2. 可使用诸如甲醇、丙酮或异丙醇之类的极性溶剂代替水以增强保留性能。

3. 确保弱针清洗溶剂/灌注溶剂采用的是起始流动相（即高比例有机相），否则会对峰形造成不利影响。典型针清洗条件：800μL强清洗液20:80 ACN/H2O中，500μL弱清洗液75:25 ACN/H2O。

4. 除非安装了正己烷/四氢呋喃兼容性套件，否则切勿将丙酮用作样品溶剂/稀释剂。