【飞诺美色谱】色谱小知识丨什么是柱外体积？

柱外体积是液相色谱中死体积重要的组成部分，它包括进样器体积，混合器体积，色谱柱前后连接管路的体积，连接配件等所产生的空间，以及检测器流通池体积。根据您使用的系统和应用，在HPLC上开发超高性能方法需要优化上述配件以减少柱外体积。

测量柱外体积的方法

等度法

等度方法的系统体积测量相当简单，可以直接在系统上进行，而无需更改流动相。首先，取出HPLC色谱柱并用零死体积两通替换色谱柱。然后以固定流速启动HPLC，并在系统中注入少量丙酮或其他有UV吸收组分，并在270nm或220nm处进行监测。从丙酮进样到色谱图中开始出峰的时间表明了系统的柱外体积。计算方法如下：

调整进样器和色谱柱入口之间的流路以及柱后流路可以减小该体积。

梯度法

虽然梯度法的柱外体积测量并不像等度法那么简单，但它操作起来也并不复杂。首先，取出HPLC色谱柱并用零死体积两通替换色谱柱。一个流动相是水，另一相是乙腈，并在流动相B中添加一定量的丙酮，此时需要切换流动相，并在适当的波长下监测紫外线以检测丙酮（220nm或270nm都可以）。梯度法即系统保持在100%A（1-2分钟），然后在几分钟内从0%至100%B梯度。从梯度开始时间到UV信号基线上升的时间延迟即为总的系统体积。计算也很简单：

梯度法柱外体积测试方法作为优化HPLC系统的重要工具，以更好的配合核壳填料（Kinetex）的柱效优势。在柱外体积测试期间，也可以交替使用进样器旁路与主路，以查看进样器回路对整个HPLC系统死体积的影响。