常规反相分析色谱柱新色谱柱开启和安装的推荐步骤

何谓常规反相色谱柱？

  那些在硅胶或杂化基质颗粒上键合了如C18、C8、C4或苯基等键合相的色谱填料所装填的色谱柱，按反相色谱条件进行操作和分离。C18是反相液相色谱柱中使用较为广泛的一款色谱柱，使用维护参考如下。

常规反相分析色谱柱新色谱柱开启和安装的推荐步骤：

1. 使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统，确保系统干净，不含任何缓冲盐和污染物。

2. 取用色谱柱时避免磕碰掉落。

3. 将色谱柱入口端连接到系统上，柱出口端先不要连接，色谱柱身上有箭头标明正确流向。

4. 在0.1 mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱，然后在2分钟内将流速升至0.5 mL/min。

5. 当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上(这样可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡)。

6. 重启流速，按照步骤4的方法逐渐提高流速，至常规分析时所使用的流速。

7. 参考柱效测试报告中的方法，使用该流动相条件平衡色谱柱，通常需要使用5-10倍柱体积的流动相，直至压力与基线稳定。

8. 测试柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物，请联系沃特世化学消耗品部门寻求支持，使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于

柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾，提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态，需要进行故障排查。

  当使用2.1 mm内径色谱柱时，建议优化系统以减少谱带展宽，包括：使用检测器微量流通池，减少进样器loop环体积，使用较小内径(如0.005’’或0.12 mm)的系统管路。并确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积。

  当使用小颗粒填料(如2.5 μm)短柱进行高效快速分离时，需要考虑以下因素：

●确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积，尽量优化系统减少谱带展宽；

●提高采样频率至10点/秒以上；

●较小粒径的色谱柱产生的柱压较高，而较小粒径要达到理想的色谱效率所需的线速度较高，请根据所用LC系统的实际情况调节流速；

●可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高，例如40℃。使用杂化颗粒反相色谱柱时，可使用45℃或更高。