葡聚糖凝胶色谱柱其详细的操作指南具体如下

2025年04月19日 09:13 来源：浙江福立分析仪器有限公司

　　葡聚糖凝胶色谱柱是一种广泛应用于生物化学、分子生物学和生物技术领域的分离技术工具，以葡聚糖凝胶作为固定相，基于分子筛分原理，通过不同大小和性质的分子在凝胶介质中的渗透性差异实现分离。其核心优势在于操作简便、分离效率高，尤其适用于蛋白质、核酸、多糖等生物大分子的纯化与分析。

　　葡聚糖凝胶颗粒具有三维网状结构，网孔大小可控。当样品溶液通过色谱柱时，大分子因无法进入凝胶颗粒内部，仅能沿颗粒间隙流动，路径短、流速快，优先被洗脱；小分子可进入颗粒内部，路径长、流速慢，后被洗脱。

　　葡聚糖凝胶色谱柱的一般操作指南：

　　一、安装与准备工作

　　选择合适的色谱柱

　　根据待分离物质的分子量范围选择合适型号的葡聚糖凝胶。如前所述，不同型号对应不同的排阻极限，确保所选凝胶的分离范围能够覆盖样品中分子量的最大和最小值。例如，若样品中蛋白质分子量在5000-50000Da之间，可选择Sephadex G-50到G-100之间的合适型号。

　　准备缓冲液

　　按照实验要求配置合适pH值和离子强度的缓冲液。缓冲液的选择要考虑样品的稳定性和与凝胶的兼容性。一般来说，磷酸盐缓冲液（PBS）或Tris-HCl缓冲液是常用的选择，pH通常维持在中性左右（pH 6.5-8.0）。缓冲液需经过过滤（如使用0.45μm滤膜）以去除杂质，防止堵塞凝胶孔隙。

　　装柱

　　将适量的葡聚糖凝胶干粉用去离子水或缓冲液充分溶胀。溶胀时间根据凝胶的类型和用量而定，一般需要数小时至过夜，以确保凝胶充分膨胀。溶胀过程中可适当搅拌，但要注意避免过度搅拌导致凝胶颗粒破碎。

　　在装柱前，先将色谱柱垂直固定在合适的支架上，关闭柱底出口。在柱底放置一层滤网或玻璃纤维，防止凝胶流失。然后将溶胀好的凝胶沿玻璃棒缓慢倒入柱中，让凝胶自然沉降，避免产生气泡。在装柱过程中，可轻轻敲击柱壁，使凝胶分布更加均匀。

　　打开柱底出口，让缓冲液缓慢流出，同时继续加入凝胶，使凝胶柱高度达到所需长度。新装好的柱子要用2-3倍柱体积的缓冲液进行平衡，以稳定凝胶的环境和柱内压力。

　　二、加样与洗脱

　　样品准备

　　将待分离的样品用适当的缓冲液进行溶解或稀释，样品浓度不宜过高，以免影响分离效果。一般蛋白质样品浓度可在1-10mg/mL之间。同时，样品要保持澄清，可通过离心（如10000rpm离心10分钟）去除沉淀等杂质。

　　加样

　　当柱子平衡好后，关闭柱底出口。用移液枪小心地将样品沿着柱壁缓慢加入到凝胶表面上，尽量避免破坏凝胶表面。加样量一般为柱床体积的1%-5%，具体可根据样品性质和分离目的进行调整。加样后，打开柱底出口，让样品慢慢渗入凝胶柱内。

　　洗脱

　　加样完成后，连接好洗脱液（一般为用于平衡柱子的缓冲液）储液瓶和柱顶端入口，开始洗脱。洗脱速度要控制适当，一般每分钟1-2滴（约0.05-0.1mL/min），具体可根据凝胶类型和样品情况优化。

　　在洗脱过程中，要持续收集流出液，可使用自动部分收集器按一定体积（如1-2mL/管）进行收集。同时，监测各收集管中物质的含量，可通过检测吸光度（如在280nm处检测蛋白质）或其他合适的检测方法来确定目标物质的洗脱峰。

　　三、柱子的维护与后处理

　　柱子的清洗与再生

　　每次使用完毕后，要用2-3倍柱体积的缓冲液冲洗柱子，以去除残留的样品成分。如果柱子在使用过程中受到污染或性能下降，可进行再生处理。例如，对于一些吸附了杂质的柱子，可用适当的清洁剂（如0.5-1M NaOH溶液）进行清洗，然后用大量去离子水冲洗干净，重新平衡后再使用。

　　柱子的保存

　　如果柱子短期内不使用（几天到几周），可将柱子浸泡在20%乙醇溶液中，以防止微生物生长和凝胶干燥。将柱子两端密封好，存放在4℃冰箱中。如果是长期不使用（几个月以上），最好将凝胶倒出，干燥后保存在阴凉干燥处。

关键词：葡聚糖凝胶色谱柱

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