阿胶衍生物测定

阿胶衍生物测定

阿胶HPLC测定主要用于氨基酸，特征肽等的成分分析。

色谱条件：

色谱柱：MorphlingTM Amino Acid 4.6*250mm 5µm

流动相A： 0.1mol/L醋酸钠溶液（pH 6.5）：乙睛＝93.0：7.0

配制方法：准确称取无水醋酸钠8.203g于1000mL水中，搅拌均匀，使之溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50；准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液930mL和乙腈70mL，混合均匀，抽滤过0.22µm滤膜；  

流动相B：水：乙腈＝20.0：80.0

配制方法：准确量取水200mL和乙腈800mL，混合均匀，抽滤过0.22µm滤膜；

梯度方法：

梯度程序：

流动相A： 0.1mol/L醋酸钠溶液（pH 6.50）：乙睛＝93：7

流动相B： 水：乙腈＝20：80

T(min)                    A%                    B%

0.0                     100.0                          0.0

11                     93.0                   7.0

13.9                           88.0                    12.0

14                   85.0                           15.0

29                        66.0                          34.0

30                         0.0                    100.0

35                         0.0                    100.0

35.1                       100.0                     0.0  

45                    100.0                                           0.0

流　速：1.0mL/min

柱　温：43℃

波 长：254nm

进样量：5μL

样品制备衍生过程

精密量取对照溶液5ml，加入25ml量瓶中，加入0.1mol/L异硫氰酸苯酯的乙腈溶液2.5ml，1.0mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，摇匀，室温放置1小时后，加入50%乙腈水至刻度，摇匀，取10ml，加正己烷10ml，振摇，放置10分钟。取下层溶液，过滤，取后续滤液，即得。

色谱图：

图1、样品衍生后

图2：取样品溶液1ml加50%乙腈水稀释1倍。（由于衍生试剂浓度过大造成样品测定过载，形成峰分叉，样品稀释1倍后测定）

结论：和曦生物的MorphlingTM Amino Acid 4.6*250mm 5µm的色谱柱可以实现对阿胶衍生后的样品进行测定。