基于新型纳米纤维的LentiHERO在LVV和HSV纯化工艺中的应用

溶瘤病毒如单纯疱疹病毒（HSV）和痘苗病毒因能在肿瘤细胞中选择性复制，诱导肿瘤细胞溶解和触发免疫应答的能力，而在癌症治疗领域中逐渐受到重视。同样，慢病毒载体（LVV），如伽利略病毒（GalV）和VSV-G能够通过实现细胞类型特异性转导来增强基因治疗效果。这些病毒对下游的纯化策略产生了影响。

常用于基因治疗的病毒载体尺寸示意图：腺相关病毒AAV、慢病毒LVV、单纯疱疹病毒HSV和痘苗病毒VACV

对于这些尺寸较大的病毒载体，传统的基于琼脂糖的层析方法在工艺放大、产量提升以及杂质（如HCP等）去除等方面存在局限性。为了解决这些瓶颈问题，Astrea Bioseparations研发推出的新一代基于纳米纤维的层析介质LentiHERO为病毒纯化提供了新的思路。相比于传统的琼脂糖基质，LentiHERO不论从结合载量、杂质去除还是工艺放大等方面都具有显著优势。以下研究将从病毒的结合能力、回收率、HCP和dsDNA的去除能力、工艺放大等方面充分评估LentiHERO对不同包膜（VSV-G、4070A、GalV）的LVV假病毒和溶瘤病毒HSV的纯化性能。

1.  LVV生产和纯化工艺流程

LentiHERO对VSV-G LVV有更高的结合力与动态结合载量

下图是VSV-G LVV样品在不同流速下通过LentiHERO（LH）与Q膜流穿液的TU和p24检测结果，LentiHERO对LVV的结合能力显著高于Q膜。由此表明，LeniHERO在LVV流穿之前能够处理更大体积的料液。

LentiHERO有更高的动态结合载量

提升LVV回收率与纯度的优化方案

如下图所示，条件优化后LVV回收率提升至82%，收获的病毒滴度＞2E+9 TU/mL，且HCD/HCP去除率＞90%。

LentiHERO®可大幅减少纯化的缓冲液体积

生产规模所需的缓冲液体积预估

• Ø  精氨酸洗脱可以省去洗脱后的稀释步骤，简化工艺流程；

• Ø  低盐或精氨酸洗脱可显著减少缓冲液用量并降低处理体积。

使用LentiHERO® 1纯化非VSV-G包膜的LVV假病毒

重组慢病毒可以通过不同的包膜蛋白来提高转导效率和改变特异性，从而直接影响下游纯化策略。

1. A . 不同类型慢病毒在细胞和基因治疗中的应用

2. B. LentiHERO® 1对LVV的回收率（TU）

• Ø  LentiHERO®成功实现了非VSV-G慢病毒（4047A：100%，GalV：36%）的高效纯化。

• Ø  LentiHERO®具备*的杂质去除能力，在不影响载体功能的情况下可去除＞98%的HCP及＞87%的dsDNA残留

2. HSV-1溶瘤病毒生产和纯化工艺流程

LentiHERO®纯化野生型HSV-1（KOS）的结果

筛选装置上样量15ml，测得填料载量为1.5E+10 IU/ml。

感染性HSV回收率为56%，LentiHERO®载量可达9.2E+9 IU/ml，大部分感染性HSV在0.6M NaCl条件下被洗脱。

LentiHERO®纯化pBACYAC-HSV-1（KOS）的结果

筛选装置上样量20ml，测得填料载量为3E+8 IU/ml。

用0.8M精氨酸洗脱，HSV回收率可达到69%，LentiHERO®载量可达1.4E+8 IU/ml，同时实现高效的杂质去除。

结论

Ø  LentiHERO®弱阴离子纳米纤维层析技术可广泛应用于多种病毒载体的纯化，包括不同包膜的慢病毒（4070A，VSV-G，GalV），溶瘤病毒HSV-1；

Ø  LentiHERO®纯化病毒具有高回收率：4070A: 100%，VSV-G: 82%，GalV: 36%，HSV-1: 69%

Ø  LentiHERO®具有高效的宿主蛋白去除效率：HCP去除率＞97%

Ø  LentiHERO®可放大形成平台工艺，适用于工业化生产

Ø  LentiHERO®具备拓展应用于其他病毒载体的潜力，如腺病毒，痘苗病毒及病毒样颗粒（VLPs）等

Ø  LentiHERO®支持基因治疗及溶瘤病毒生产工艺的优化

产品信息

如您对上述产品感兴趣，欢迎点击这里填写信息，Astrea Bioseparations技术专家将为您提供个性化优化方案，切实帮您解决纯化工艺中的疑难问题。

Astrea Bioseparations于1987年孵化自剑桥大学，拥有超过30年层析介质研发和生产经验，是世层析介质产品与服务供应商。目前使用Astrea的产品已有超过21个生产工艺通过了FDA和EMA的批准。Astrea Bioseparations在全球拥有3个研发和生产基地，专注为生物大分子和CGT领域提供行业层析介质和技术服务。Astrea Bioseparations推出的基于纳米纤维的新型层析技术，解决了传统生物分离工具载量低和工艺耗时问题，实现更快、更环保、更具成本效益的纯化过程，符合当今生物治疗创新的需求。

西美杰是Astrea Bioseparations中国区代理，为用户提供*的技术支持与售后服务。