Kromasil液相色谱柱154|川芎配方颗粒特征图谱的测定 高效液相色谱法
案例说明
川芎配方颗粒试样经70%甲醇超声提取后,采用梯度洗脱,用紫外检测器检测。川芎配方颗粒应呈现10个特征峰。
分析条件
色谱柱:Kromasil 100-5-C18,4.6*250mm (订货号:M05CLA25)
流动相:(A)乙腈 (B)0.1%磷酸溶液
按下表进行梯度洗脱:
时间/min | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 8 | 92 |
5 | 8 | 92 |
25 | 20 | 80 |
45 | 40 | 60 |
50 | 80 | 20 |
65 | 80 | 20 |
流速:1.0mL/min
进样量:10μL
柱温:25℃
波长:300nm
分析图谱
依据色谱条件(4.2),分别将对照品参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪进行测定,参照物溶液的色谱图如图 1所示,色谱图积分结果见表1。
表1对照品参照物溶液色谱图积分结果
目标物 | 保留时间 | 峰面积 | 峰高 | 理论塔板数 | 分离度 | 对称/拖尾因子 |
阿魏酸 | 30.575 | 1872.393 | 162.713 | 166874 | - | 1.04 |
由表1中数据可知,阿魏酸的理论塔板数为166874,满足《川芎配方颗粒》中规定的阿魏酸峰的理论塔板数不低于4000的要求。
供试品溶液的色谱图如图2所示,色谱图积分结果见表2,特征峰相对保留时间结果见表3。
表2供试品溶液色谱图积分结果
目标物 | 保留时间 | 峰面积 | 峰高 | 理论塔板数 | 分离度 | 对称/拖尾因子 |
1:绿原酸 | 17.717 | 363.212 | 36.420 | 74022 | - | 1.07 |
2:隐绿原酸 | 19.242 | 188.500 | 19.851 | 95643 | 5.99 | 1.01 |
3:咖啡酸 | 21.383 | 234.216 | 21.459 | 88350 | 7.98 | 1.01 |
4 | 22.483 | 341.531 | 28.564 | 84517 | 3.69 | 1.06 |
5(S):阿魏酸 | 30.567 | 1091.744 | 93.979 | 163765 | 26.45 | 1.07 |
6 | 34.192 | 91.799 | 8.378 | 353859 | 13.63 | 1.83 |
7:洋川芎内酯I | 37.183 | 332.728 | 34.585 | 341335 | 12.35 | 1.02 |
8 | 38.658 | 68.700 | 7.003 | 354003 | 5.74 | 1.03 |
9 | 46.092 | 77.477 | 8.910 | 632635 | 30.24 | 1.01 |
10:洋川芎内酯A | 53.275 | 58.848 | 13.239 | 3619526 | 41.80 | 1.13 |
表3 特征峰相对保留时间结果表
目标物 | 保留时间 | 相对保留时间测定值 | 相对保留时间规定值 | 偏差(%) |
1:绿原酸 | 17.717 | 0.580 | 0.576 | 0.63 |
2:隐绿原酸 | 19.242 | 0.630 | 0.626 | 0.56 |
3:咖啡酸 | 21.383 | 0.700 | 0.678 | 3.18 |
4 | 22.483 | 0.736 | 0.731 | 0.62 |
5(S):阿魏酸 | 30.567 | - | - | - |
6 | 34.192 | 1.119 | 1.134 | -1.36 |
7:洋川芎内酯I | 37.183 | 1.216 | 1.256 | -3.15 |
8 | 38.658 | 1.265 | 1.306 | -3.16 |
9 | 46.092 | 1.508 | 1.528 | -1.32 |
10:洋川芎内酯A | 53.275 | 1.743 | 1.776 | -1.86 |
由表2和表3中数据可知,川芎配方颗粒供试品溶液的特征峰个数为10个,与《川芎配方颗粒》中规定的特征峰个数一致;各特征峰与阿魏酸峰的相对保留时间分别为0.580(峰1)、0.630(峰2)、0.700(峰3)、0.736(峰4)、1.119(峰6)、1.216(峰7)、1.265(峰8)、1.508(峰9)、1.743(峰10),均在规定值的±10%范围之内。
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鲲霆生物现为Nouryon旗下品牌Kromasil液相色谱柱及制备填料中国区总代理。主营业务为代理销售各类实验室精密仪器、试剂耗材以及相关领域的技术开发与咨询服务。
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