Kromasil液相色谱柱155|大青叶配方颗粒特征图谱的测定 高效液相色谱法
案例说明
大青叶配方颗粒试样经水超声提取后,采用梯度洗脱,用紫外检测器检测。大青叶配方颗粒应呈现11个特征峰。
分析条件
色谱柱:Kromasil 100-5-C18(w),4.6x250mm (订货号:M05WLA25)
流动相:(A)甲醇 (B)0.1%磷酸溶液
按下表进行梯度洗脱:
时间/min | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 0 | 100 |
20 | 3 | 97 |
40 | 20 | 80 |
80 | 45 | 55 |
100 | 70 | 30 |
流速:1.0mL/min
进样量:10μL
柱温:30℃
波长:260nm
分析图谱
依据上述色谱条件,分别将参照物溶液与供试品溶液注入液相色谱仪进行测定,
参照物溶液的色谱图如图1和图2所示,色谱图积分结果见表1。
表1参照物溶液色谱图积分结果
目标物 | 保留时间 | 峰面积 | 峰高 | 理论塔板数 | 分离度 | 对称/拖尾因子 |
尿苷 | 13.683 | 1325.626 | 88.005 | 20010 | - | 1.04 |
腺苷 | 17.983 | 1978.065 | 77.867 | 14068 | 8.66 | 1.57 |
鸟苷 | 24.833 | 1589.416 | 71.842 | 30912 | 11.70 | 1.09 |
紫丁香苷 | 51.983 | 1822.787 | 109.000 | 226580 | - | 0.96 |
由表1中数据可知,紫丁香苷峰的理论塔板数为226580,满足《大青叶配方颗粒》中规定的不低于5000的要求。
供试品溶液的色谱图如图3所示,色谱图积分结果见表2,特征峰相对保留时间结果见表3
表2 供试品溶液色谱图积分结果
目标物 | 保留时间 | 峰面积 | 峰高 | 理论塔板数 | 分离度 | 对称/拖尾因子 |
1:尿苷 | 13.758 | 3140.146 | 203.821 | 19981 | - | 0.98 |
2:腺苷 | 18.108 | 938.206 | 40.028 | 14160 | 8.72 | 1.48 |
3:鸟苷 | 24.933 | 1452.136 | 56.695 | 26634 | 11.19 | 1.39 |
4 | 31.950 | 662.504 | 35.505 | 64873 | 12.61 | 1.22 |
5 | 38.242 | 625.214 | 33.416 | 166222 | 14.35 | 1.57 |
6(S):紫丁香苷 | 52.033 | 720.704 | 41.351 | 242837 | 34.59 | 1.18 |
7 | 56.233 | 235.898 | 12.782 | 209504 | 9.19 | 1.03 |
8 | 66.383 | 621.233 | 30.348 | 236654 | 19.58 | 0.88 |
9:异荭草苷 | 69.067 | 486.083 | 20.501 | 305205 | 5.13 | 1.78 |
10:异牡荆苷 | 78.400 | 1677.888 | 91.957 | 417521 | 18.95 | 1.00 |
11:异金雀花素 | 80.108 | 615.450 | 32.211 | 407043 | 3.46 | 0.97 |
表3 特征峰相对保留时间结果表
目标物 | 保留时间 | 相对保留时间测定值 | 相对保留时间规定值 | 偏差 |
4 | 31.950 | 0.614 | 0.567 | 8.30 |
5 | 38.242 | 0.735 | 0.686 | 7.14 |
6(S):紫丁香苷 | 52.033 | - | - | - |
7 | 56.233 | 1.081 | 1.159 | -6.75 |
8 | 66.383 | 1.276 | 1.308 | -2.46 |
9:异荭草苷 | 69.067 | 1.327 | 1.352 | -1.82 |
10:异牡荆苷 | 78.400 | 1.507 | 1.465 | 2.85 |
11:异金雀花素 | 80.108 | 1.540 | 1.511 | 1.89 |
由表2和表3中数据可知,大青叶配方颗粒供试品溶液的特征峰个数为11个,与《大青叶配方颗粒》中规定的特征峰个数一致;峰1-3,峰6的保留时间与参照物溶液的保留时间相对应,峰4、峰5、峰7、峰8、峰9、峰10和峰11与紫丁香苷(S峰)的相对保留时间分别为0.614、0.735、1.081、1.276、1.327、1.507和 1.540,均在规定值的±10%范围之内。
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鲲霆生物现为Nouryon旗下品牌Kromasil液相色谱柱及制备填料中国区总代理。主营业务为代理销售各类实验室精密仪器、试剂耗材以及相关领域的技术开发与咨询服务。
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