应用 | 多肽与小肽的分析

一、用亲水性相互作用色谱柱NH2P-50 4E分析咪唑二肽

鹅肌肽是组氨酸和β-丙氨酸的二肽，肌肽是1-甲基-L-组氨酸和β-丙氨酸的二肽，总称为咪唑二肽。咪唑二肽在禽类的胸部肉、金枪鱼、鲣鱼、鲸鱼肉中含量很多。下图是使用聚合物基质氨基柱Asahipak NH2P-50 4E利用亲水模式分析鹅肌肽、肌肽、β-丙氨酸、1-甲基-L-组氨酸的应用实例，能达到良好的分析效果。
【注意】本实验色谱柱需要事先平衡。
色谱柱平衡：50 mM NaH2PO4 aq.使用0.5 mL/min通液2小时，再置换成流动相。

Sample : 20 μL
1. β-Alanine 200 μg/mL
2. 1-Methyl-L-histidine 2 μg/mL
3．L-Anserine 5 μg/mL
4. Histidine 5 μg/mL
5. L-Carnosine 5 μg/mL
6. Nitrate
(derived from L-Anserine Nitrate)

Column: Shodex Asahipak NH2P-50 4E (4.6 mm I.D. x 250 mm)

Eluent: 50 mM NaH2PO4 aq./CH3CN=40/60

Flow rate: 1.0 mL/ min

Detector: UV (210 nm)

Column temp.: 40 ℃

二、用亲水性相互作用色谱柱VC-50 2D分析小分子肽

近年来小分子肽（二肽，三肽）的生理功能受到关注。 以下是使用聚合物基质HILIC色谱柱HILICpak VC-50 2D柱进行二肽和三肽的LC/MS分析，含有碱性氨基酸的肽保留强。

Sample : 5 μL  50 ng/mL each (in H2O)

Column: Shodex HILICpak VC-50 2D (2.0 mm I.D. x 150 mm)

Eluent: (A); 100 mM HCOOH aq. (B); CH3CN

      Linear gradient (High pressure);

     (B %) 60 % (0 to 5 min)，60 % to 10% (5 to 6 min)，10 % (6 to 15 min)，60 % (15.1 to 20 min)

Flow rate: 0.3 mL/min

Detector: ESI-MS (SIM Positive)

Column temp.: 40 ℃

三、用聚合物反相色谱柱ODP-50 6D在酸性和碱性流动相下分析多肽

多肽是由多个氨基酸通过肽键连接而形成的一类化合物，通常由10~100个氨基酸分子组成，相对分子质量低于10000。多肽在生物体内广泛参与和调节机体内各系统、器官、组织和细胞的功能活动，在生命活动中发挥重要作用。近年来，利用现代生物技术合成的多肽药物已成为药物研发的热点之一，目前已广泛应用多种疾病的预防、诊断和治疗，具有广阔的开发前景。

以下是使用Asahipak ODP-50 6D (反相色谱柱) 在酸性和碱性流动相下多肽的分析。

Sample:

1.Glu-Gly-Phe

2.Met-Enkephalin

3.Leu-Enkephalin

4.Leu-Trp-Met

Column：Shodex Asahipak ODP-50 6D (6.0 mm I.D. x 150 mm)

Eluent：(1); 0.05 % TFA aq./CH3CN=85/15
(2); 50 mM Ammonium acetate buffer(pH10.0)/CH3CN=85/15

Flow rate：1.0 mL/min

Detector：UV (220 nm)

Column temp.：30 ℃

四、用复合模式柱GS-320 HQ分析多肽

虽然Asahipak GS-HQ系列基本上是SEC模式色谱柱，但其结合了疏水性相互作用(RPC)和离子相互作用模式(IEX: ion exclusion)，这种复合模式使原先不能分离的分析实验变为可能。如下实例可见，等电点(pI)低的酸性肽由于离子排阻作用先被洗脱，等电点高的碱性肽由于离子交换作用较晚被洗脱出来。由此可以在分离酸性肽和碱性肽上发挥作用。

Sample: 20 µL

1.Glu-Ala-Glu 0.025 %

2.Arg-Asp 0.05 %

3.Gly-His-Lys 0.025 %

4.Arg-Pro-Lys-Pro 0.025 %

PI: Isocratic point
Σf: Hydrophobic parameter

Column：Shodex Asahipak GS-320 HQ (7.5 mm I.D. x 300 mm)

Eluent：50 mM Ammonium acetate buffer (pH6.7)

Flow rate：0.5 mL/min

Detector：UV (220 nm)

Column temp.：30 ℃

五、用水溶性尺寸排阻柱KW-802.5根据EP标准分析特立帕肽

特立帕肽是一种合成的多肽激素（分子量约为4,100），为人甲状旁腺素PTH的1-34氨基酸片段，用于治疗骨质疏松症。欧洲药典(EP 9.0*)对于其高分子杂质的分析规定使用排阻限150,000的水溶性硅胶基质蛋白质分离色谱柱，系统适应性要求单体和二聚体的分离度达到2.0以上。使用PROTEIN KW-802.5可以满足相关药典关于系统适用性的要求。（*数据采集时的版本）

Sample: 20 µL
(Resolution solution)

1.0 mg/mL of Teriparatide** in H2O
**pretreated at 75 ℃ for 24 hours

1.Trimer

2.Dimer

3.Monomer

Column：Shodex PROTEIN KW-802.5 (8.0 mm I.D. x 300 mm)

Eluent：H2O/CH3CN/TFA=750/250/1

Flow rate：0.5 mL/min

Detector：UV (214 nm)

Column temp.：25 ℃

产品信息

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