多肽分析方法开发，赋能药物研发（MD软件篇）

在多肽分析方法开发过程中，不同的分析阶段可能选择不同的方式来做：

依托LabSolutions MD方法开发软件，结合岛津针对多肽分析检测不同选择性的色谱柱，实现强强联动。批量筛选色谱柱、检测条件。全面快速助力多肽分析方法开发。

此次研究基于一种肽和五种具有不同序列的有关杂质作为合成肽的模型样品(表1)。制备全长肽(FLP:B-促黑素)、较短长度产物的 p.A1del、p.A1_E2del、p.A1_K3del 和 p.A1、D5del的缺失序列以及 Met(O2)(FLP 中的甲硫氨酸被氧化成甲硫氨酸砜)作为样品。此次筛选中，分别筛选了不同的键合相，涉及C18、C8、Phenyl，PFPP等，同时也考虑了不同孔径的影响，对比了常规120A孔径的C18以及300A大孔的C18色谱柱。

表1 靶肽和有关杂质的序列

色谱柱：

Shim-pack Scepter C18-120，1.9μm，3.0x100mm

Shim-pack GISS C18，1.9μm，3.0x100mm

Shim-pack Velox SP-C18，1.8μm，3.0x100mm

Shim-pack Scepter C8，1.9μm，3.0x100mm

Shim-pack Scepter Phenyl，1.9μm，3.0x100mm

Shim-pack GIST HP C18-AQ，1.9μm，3.0x100mm

柱温：40℃

样品溶剂：水

流动相：

A：

Line A：0.1%三氟乙酸水溶液

Line B：0.1%甲酸水溶液

Line C：10mmol/L甲酸铵（pH=4）水溶液

Line D：10mmol/L乙酸铵（pH=5）水溶液

B：

Line A：乙腈

Line B：甲醇

流速：0.5mL/min

洗脱梯度：10%（0min）→60%（10 min）→10%(10.01min-15min）

紫外检测器：220 nm

质谱系统：LCMS-2050

分析得到的谱图如下所示：

通过流动相和色谱柱的筛选结果表明，水相流动相和有机相流动相的组成对 FLP 及相关杂质的分离有显著影响。

基于LabSolutions MD软件计算评估值，如表2所示。从中选择最优的分析条件进行进一步方法优化。

表2 不同色谱柱以及检测条件数据评估值

进一步优化柱温，考察筛选出评估值最高的3个检测条件下，柱温对于分离的影响。使用 Scepter C8-120 色谱柱，通过 0.1%甲酸和甲醇的流动相组合物，分离p.A1del和 FLP 之间的分离度最高。

后期再进行进一步的条件优化阶段，通过调整起始流动相比例、梯度条件、流速等进一步提高分离度和稳定性。

最终结合LabSolutions MD，进行最佳条件下的设计空间评价，通过叠加设计空间自动搜索满足多个标准的最佳条件。找到最佳的A检测条件。实现杂质的有效分离。

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